杂交瘤细胞培养有关注意事项

细胞株运输方式：常温 3 天

赠送： 5 瓶无需饲养层的扩大培养基（冷藏运输）（民海类胎牛血清）

扩大培养基保存： -20 度，内含生长因子。

扩大培养基使用：使用先用干净的自来水或者纯净水在干净的容器里化开并

回温至水温的温度 （20-25 度），花开后更换水，回温时间 10-20 分钟即可。

细胞冻存： 一个 24 孔冻存 2 支细胞，200 微升/支 ；

冻存液配方：20%DM 胎牛：DMSO=9:1

关于腹水制备： 生长良好的 2 个 24 孔 细胞数总量在 60W-90W，正好可以

打一只小鼠；生长良好的 1 个 6 孔 细胞数总量在 60W-90W，正好可以打一只小鼠 。一只小鼠可以打 50-120W 个细胞，根据想要的效价确定细胞数量，一般

60W-120W 的细胞做出来的腹水效价在 10-60W.

注意事项：

1. 收到细胞后先将其扩到 1-2 个 24 孔中，5%二氧化碳 37 度培养箱，静止培养过夜，待细胞长至 80-90%满时，即可扩大培养，建议首选饲养细胞层，饲养细胞预铺 2-4 天，其次用扩大培养基 1 扩 2 培养。

2. 融化培养基时，应使用干净的自来水或者纯净水在干净的容器里，容器里水面高度务必小于等于瓶内的液面高度，化开期间不要摇晃瓶身，待其完全化开后，

立即更换水温（20-25 度）的水，这时的水面可以高于瓶内的液面高度，回温时间 10-20 分钟即可立即使用。

3.胎牛使用 ：固定品牌（杭州四季青胎牛或者民海类胎牛血清或者 GIBCO 进口胎牛血清）17-20%浓度使用 DMEM 培养基。各血清之间不可互换，可以先半换，根据情况再全换。

4. 细胞生长：细胞扩大时必须等到对数生长期，不要提前或长过延后，即 80-90%

满时，即可扩大培养，建议用扩大培养基 1 扩 2 培养；如果使用饲养层细胞，不可以用扩大培养基，需要用 17-20%浓度的 DMEM 普通培养基，HT 或者无 HT

均可，HT 优先。