猪瘟蛋白(CSFV)荧光实验步骤
发布时间：2016-07-12 点击数：2682
1.st细胞铺96孔板一个。（用无血清培养基稀释病毒）
2.（一）病毒过滤无菌后，将三株单抗6d6,12f3,14e6，分别稀释1k倍，2k倍，2k倍，（可以先将抗体稀释十倍即10ul抗体加90ul培养基；再将10ul加入2ml猪瘟病毒中），共四个样，（原毒，原毒加6d6，原毒加12f3，原毒加14e6）。
（二）病毒稀释十倍后，按照上述步骤将抗体同样分别稀释，共四个样，混匀待用。（原毒稀释10倍，原毒稀释10倍加6d6，原毒10倍加12f3，原毒10倍加14e6）
3.将贴壁后的96孔上清弃掉，加入上面8个样30ul/孔，各四个重复，吸附1h。
4.补液50ul/孔。2%st培养基。
5.96h一收并补液100ul/ 孔。
6.144h二收。1 。pbs洗三次后弃掉pbs，拍干；
2. 加上冷乙醇固定20分钟（加完放-20摄氏度20分钟），弃掉上清，不用拍板；
3. pbs洗三次，弃上清，不用拍板，吸干水分；
4. 加入一抗37度半小时，pbs洗三次，吸干水分；
5. 加入二抗37度半小时，pbs洗4 次，观察显微镜。
6.注意事项：pbs洗要温柔，加入从同一个位点； 做不接毒的空白细胞的对照。
2.（一）病毒过滤无菌后，将三株单抗6d6,12f3,14e6，分别稀释1k倍，2k倍，2k倍，（可以先将抗体稀释十倍即10ul抗体加90ul培养基；再将10ul加入2ml猪瘟病毒中），共四个样，（原毒，原毒加6d6，原毒加12f3，原毒加14e6）。
（二）病毒稀释十倍后，按照上述步骤将抗体同样分别稀释，共四个样，混匀待用。（原毒稀释10倍，原毒稀释10倍加6d6，原毒10倍加12f3，原毒10倍加14e6）
3.将贴壁后的96孔上清弃掉，加入上面8个样30ul/孔，各四个重复，吸附1h。
4.补液50ul/孔。2%st培养基。
5.96h一收并补液100ul/ 孔。
6.144h二收。1 。pbs洗三次后弃掉pbs，拍干；
2. 加上冷乙醇固定20分钟（加完放-20摄氏度20分钟），弃掉上清，不用拍板；
3. pbs洗三次，弃上清，不用拍板，吸干水分；
4. 加入一抗37度半小时，pbs洗三次，吸干水分；
5. 加入二抗37度半小时，pbs洗4 次，观察显微镜。
6.注意事项：pbs洗要温柔，加入从同一个位点； 做不接毒的空白细胞的对照。