DON 呕吐毒素单抗对小鼠呕吐毒素中毒解毒试验
1 材料与方法
1.1 试验动物
健康昆明系小白鼠6只，体重18g±2g。
1.2 主要试剂
黄曲霉毒素标准品(DON 呕吐毒素)、抗DON 呕吐毒素-B6单抗(稀释倍数为1:64W时，OD值为1.02。)
1.3 试验动物分组
将健康小鼠饲养观察两周后，随机分成A、B、C共3组，A组为空白对照组(2只)；B组为试验对照组(2只)，即仅注射黄曲霉毒素标准品；C组为试验组(2只)，注射黄曲霉毒素标准品+注射黄曲霉毒素单抗。
1.4 小鼠DON 呕吐毒素中毒试验和解毒实验
1.4.1 A组：小鼠不做任何处理，只按常规方法喂养，每天观察一次常规指标(进食、体重、精神、运动情况)。
1.4.2 B组、C组：试验第1天，100μl DON 呕吐毒素 1mg/ml+400μl生理盐水，取100μl静脉注射到18g左右昆明鼠尾部。即注射剂量为20μg DON 呕吐毒素/18g。
试验第7天，150μl DON 呕吐毒素 1mg/ml+350μl生理盐水，取100μl静脉追加注射到18g左右昆明鼠尾部。即注射剂量为30μg DON 呕吐毒素/18g。
1.4.3 C组：C组小鼠出现中毒症状后，当日尾静脉注射抗黄曲霉毒素(DON 呕吐毒素)单抗(30μl DON 呕吐毒素-B6+270μl生理盐水，取100μl静脉注射)，以后每天观察一次常规指标(进食、体重、精神、运动情况)，直至小鼠恢复正常的生理状况。
1.5 检测方法
1.5.1 临床症状观察 每天观察各组小鼠的采食、饮水、精神、粪便、被毛、运动等临床表现。
1.5.2 体重称量 每天各组小鼠给水量相同，共饲喂14天，每天称重1次。
2 小鼠DON 呕吐毒素中毒和解毒的结果
小鼠DON 呕吐毒素中毒和解毒的结果见表1。
表1 小鼠中毒解毒试验结果
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项目 |
A组(对照组) |
B组(DON 呕吐毒素试验对照组) |
C组(DON 呕吐毒素试验组) |
备注 |
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第1天 注射毒素 |
① 16.0g/只; ② 16.8g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 18.0g/只; ② 16.0g/只。 进食正常,精神正常, 行动迅速。 尾静脉注射20μg DON 呕吐毒素/只。 |
① 16.7g/只; ② 16.5g/只。 进食正常,精神正常, 动迅速。 尾静脉注射20μg DON 呕吐毒素/只。 |
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第2天 |
① 16.4g/只; ② 17.2g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 18.3g/只; ② 16.2g/只。 进食减少,精神正常, 行动迅速。 |
① 16.3g/只; ② 16.5g/只。 进食减少,精神正常, 动迅速。 |
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第3天 |
① 17.5g/只; ② 18.0g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 19.0g/只; ② 16.5g/只。 进食减少,精神正常, 行动迅速。 |
① 16.5g/只; ② 16.7g/只。 进食减少,精神正常, 动迅速。 |
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第4天 |
① 18.4g/只; ② 18.6g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 19.7g/只; ② 17.0g/只。 进食减少,精神正常, 行动迅速。 |
① 17.0g/只; ② 17.3g/只。 进食减少,精神正常, 动迅速。 |
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第5天 |
① 19.1g/只; ② 19.2g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 20.2g/只; ② 18.5g/只。 进减少,精神正常, 行动迅速。 |
① 17.5g/只; ② 18.6g/只。 进食减少,精神正常, 行动迅速。 |
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第6天 |
① 20.0g/只; ② 20.2g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 20.2g/只; ② 19.5g/只。 进食减少,精神正常, 行动迅速。 |
① 17.6g/只; ② 19.4g/只。 进食减少,精神正常, 行动迅速。 |
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第7天 追加毒素 |
① 20.2g/只; ② 20.4g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 21.0g/只, ② 20.2g/只, 进食减少,精神正常, 行动迅速。 追加30μg DON 呕吐毒素/只昆明鼠。 |
① 18.0g/只; ② 20.3g/只。 进食减少,精神正常, 行动迅速。 追加30μg DON 呕吐毒素/只昆明鼠。 |
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第8天 |
① 20.3g/只; ② 20.8g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 19.8g/只。 进食大大减少,精神低迷, 行动迟缓。 ② 24h死亡。 |
① 16.9g/只; ② 20.1g/只。 进食减少,精神低迷, 行动迟缓。 |
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第9天 注射DON 呕吐毒素单抗 |
① 20.4g/只; ② 21.8g/只。 进食正常,精神正常。 |
① 48h死亡。
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① 16.3g/只; ② 19.6g/只。 进食减少,精神低迷, 行动缓慢。 尾静脉注射DON 呕吐毒素单抗。 |
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第10天 |
① 20.9g/只; ② 22.4g/只。 进食正常,精神正常。 |
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① 16.3g/只; ② 19.6g/只。 进食减少,精神正常, 行动迅速。 |
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第11天 |
① 21.0g/只; ② 22.8g/只。 进食正常,精神正常。 |
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① 16.8g/只; ② 20.1g/只。 进食正常,精神正常, 行动迅速。 |
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第14天 |
① 21.0g/只; ② 22.8g/只。 进食正常,精神正常。 |
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① 19.0g/只; ② 22.2g/只。 进食正常,精神正常, 行动迅速。 |
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3 结论
3.1 小鼠DON 呕吐毒素中毒的结果
试验对照组、试验组小鼠注射DON 呕吐毒素后，结果见表1。空白对照组小鼠在试验期间各指标一直正常，试验对照组与试验组小鼠第一次给毒20μg DON 呕吐毒素/16g小鼠，第2-7天中出现轻度中毒症状，即食欲不振，体重增速减缓。追加剂量30μg DON 呕吐毒素/18g小鼠后第2天即出现重度中毒症状，即食欲减退、精神低迷、行动减缓，体重降低，严重者1-2天内死亡。表明小鼠中毒剂量在20~50μg之间。
3.2小鼠DON 呕吐毒素解毒的结果
试验组小鼠出现中毒症状后2天，进行解毒即注射10μl抗DON 呕吐毒素-B6单抗/只小鼠，第2天即出现解毒症状，精神恢复正常，行动自如，体重不再减少。解毒后第3天体重增加，第4天增重明显，恢复正常，精神良好，行动迅速。表明DON 呕吐毒素单抗治疗效果明显，见效快。注射10μl单抗剂量也较合适。