产品介绍
【用途】 用于小鹅瘟病毒核酸的检测。
【试剂】
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编号 |
20T |
50T |
保存 |
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裂解液 |
4mL |
10mL |
室温 |
A盒 |
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无水乙醇 |
4mL |
10mL |
室温 |
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去蛋白漂洗液 |
12mL |
28mL |
室温 |
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洗涤液 |
32mL |
77mL |
室温 |
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洗脱液 |
2mL |
5mL |
室温 |
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蛋白酶K |
0.2mL |
0.5mL |
-20℃ |
B盒 |
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PCR反应液 |
200μL |
500μL |
-20℃ |
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引物 |
40μL |
100μL |
-20℃ |
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阳性对照 |
30μL |
30μL |
-20℃ |
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阴性对照 |
300μL |
300μL |
-20℃ |
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DL2000 DNA Marker |
20μL |
50μL |
-20℃ |
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【操作步骤】
1.样本前处理及核酸提取
样本前处理：
取适量病料心、肝、肠等组织，于灭菌研钵充分研磨，用PBS按照1：3体积稀释成均匀乳剂，经10 000rpm离心3 min。
核酸提取：
(1)取200μL上述样本离心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL离心管,然后加入200μL裂解液，剧烈振荡。(蛋白酶K开盖使用后建议存于2-8℃)混匀5～10秒。
(2)56℃温浴10分钟。
(3)在上述离心管中加入200μL无水乙醇，充分振荡混匀5～10秒。
(4)将步骤3中混匀的液体转移至一只套有收集管的纯化柱上，10 000rpm离心1分钟，弃去套管内液体。
(5)将500μL去蛋白漂洗液加入纯化柱上，10 000rpm离心1分钟，并弃去套管内液体。
(6)将700μL洗涤液加入纯化柱上，10 000rpm离心1分钟，并弃去套管内液体。
(7)可选：重复步骤（6）。
(8)再将纯化柱放回接液管上，13 000rpm离心1分钟。
(9)将纯化柱移到一只干净的1.5mL离心管中。
(10)向离心柱内加50μL洗脱液，室温静置1分钟后12 000rpm离心1分钟，弃纯化柱，离心管内液体中含有基因组DNA。提纯的基因组DNA如果不立即使用，请保存于-20℃。
2. PCR加样体系（总体系20 μL）：将下列试剂加入PCR反应管中。