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杂交瘤细胞培养有关注意事项

发布时间:2016-06-28 点击数:3007

细胞株运输方式:常温 3 

赠送 5 瓶无需饲养层的扩大培养基(冷藏运输)(民海类胎牛血清)

扩大培养基保存: -20 度,内含生长因子。

扩大培养基使用:使用先用干净的自来水或者纯净水在干净的容器里化开并

回温至水温的温度 (20-25 度),花开后更换水,回温时间 10-20 分钟即可。

细胞冻存: 一个 24 孔冻存 2 支细胞,200 微升/支 ;

冻存液配方:20%DM 胎牛:DMSO=9:1

关于腹水制备: 生长良好的 2  24 孔 细胞数总量在 60W-90W,正好可以

打一只小鼠;生长良好的 1 个 6 孔 细胞数总量在 60W-90W,正好可以打一只小鼠 。一只小鼠可以打 50-120W 个细胞,根据想要的效价确定细胞数量,一般

60W-120W 的细胞做出来的腹水效价在 10-60W.

注意事项:

1. 收到细胞后先将其扩到 1-2 个 24 孔中,5%二氧化碳 37 度培养箱,静止培养过夜,待细胞长至 80-90%满时,即可扩大培养,建议首选饲养细胞层,饲养细胞预铺 2-4 天,其次用扩大培养基 1 扩 2 培养。

2. 融化培养基时,应使用干净的自来水或者纯净水在干净的容器里,容器里水面高度务必小于等于瓶内的液面高度,化开期间不要摇晃瓶身,待其完全化开后,

立即更换水温(20-25 度)的水,这时的水面可以高于瓶内的液面高度,回温时间 10-20 分钟即可立即使用。

3.胎牛使用 :固定品牌(杭州四季青胎牛或者民海类胎牛血清或者 GIBCO 进口胎牛血清)17-20%浓度使用 DMEM 培养基。各血清之间不可互换,可以先半换,根据情况再全换。

4. 细胞生长:细胞扩大时必须等到对数生长期,不要提前或长过延后,即 80-90%

满时,即可扩大培养,建议用扩大培养基 1 扩 2 培养;如果使用饲养层细胞,不可以用扩大培养基,需要用 17-20%浓度的 DMEM 普通培养基,HT 或者无 HT

均可,HT 优先。

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