猪瘟抗体ELISA检测说明书-2015

经典猪瘟抗体ELISA检测试剂盒使用说明书

【产品简介】猪瘟ELISA检测试剂盒用于免疫猪瘟疫苗后的抗体动态水平监测，指导免疫预防工作，评估猪瘟疫苗免疫状况，也可用于该病的流行病学调查。

【产品内容】

试剂盒成分	数量	备注
包被板	96T×2
阳阴性对照	1ml×2
酶标结合物	22ml×1
样品稀释液	40ml×1
底物液 A,底物液 B,终止液	12ml×3	先加底物液A，更换枪头后，再加B
20×浓缩洗涤液	40ml×1	用水稀释到800ml,于4度保存2-6个月，每次用前一天取出放室温回温
封口胶，使用说明书	2×1份
血清稀释板，排枪加样槽	2×2个	加样槽请用一次性塑料手套套住，加不同溶液时更换手套，防止不同溶液的交叉污染

【用法与判定】

1、需要自备的器材

1.1微量移液器，8道排枪；

1.2 微量移液器配套使用的枪头；

1.3 用来稀释洗涤液的500ml量筒；

1.4 酶标仪；

1.5 蒸馏水或去离子水。

2、样品的制备

2.1 血清的制备：耳缘静脉取血20微升左右于离心管中，勿晃动离心管防止溶血，置4℃静置1h，然后1000rpm离心5min，取出淡黄色血清备用，若当天不测，血清应-20℃保存；

2.2 用样品稀释液将待检血清样品进行100倍稀释（建议：1μl血清样品加入99μl样品稀释液中），样品加入包被板前要充分混匀，稀释不同待检样品注意更换枪头。注意：①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生；②不能稀释阴性、阳性对照。

3、操作步骤（﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀，所有试剂应恢复至室温）

3.1 在A1和B1孔中分别加入100μl阳性对照；

3.2 在A2和B2孔中分别加入100μl阴性对照；

3.3 取100μl经1：100稀释好的待检样品加入其他孔中，并做好记录；

3.4 37℃孵育20min；

3.5 将各孔的液体弃入废液桶，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释成1×后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复3次，每次30s，用毛巾或者纸巾拍干孔内残余液体；

3.6 每孔加100μl酶标结合物；

3.7 37℃孵育20min；重复步骤3.5；

3.8 每孔先加50μl底物液A，再加50μl底物液B；

3.9 37℃孵育10min（避光显色）；每孔再加50μl终止液终止反应。

3.10 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。

4、试验有效性判断

4.1阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD₄₅₀值≤0.3；

4.2阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD₄₅₀值＞0.3；

4.3 P/N = 样本OD/ N值 ,若阴性对照均值小于等于0.1，则N值=0.1+阴性对照均值；若阴性对照均值大于0.1，则N值=阴性对照均值。

4.4结果判定：P/N ≥2 ，判定该检测样品为阳性；2≤ P/N＜3 ，判定该检测样品为可疑；P/N ＜2，判定该检测样品为阴性；P/N ≥3，判定该检测样品为阳性

，P/N越大，阳性越强。

4.5若没有酶标仪，则不需要加终止液目测，只要样品孔的蓝色深度明显深于阴性对照孔，则判定为阳性，反之为阴性。

【注意事项】

（1）因反应时间短，待检血清样品数量过多时，应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后，再统一用排枪将血清样品加入酶标板中，使反应时间一致。

（2）试剂盒每种试剂，严禁交叉污染，吸取不同液体，一定更换枪头。

（3）加样槽用前请用一次性塑料手套套住，加不同溶液时更换手套，防止不同溶液的交叉污染。

（4）所有试剂应在2～8℃存放；使用前恢复到室温，使用后放回2～8℃。

（5）不要使用超过有效期的试剂，不同批次试剂盒的组分不要混用。

（6）操作过程中的移液、计时和洗涤必须精确，取血清时尽量避免溶血发生，溶血严重的应重取，以免影响结果。

【规格与包装】96T×2

【贮藏与有效期】2～8℃避光保存，有效期为12个月。

【仅供科学研究使用】

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