【操作步骤】
1.核酸提取
(1) 取疑似病料(气管及分泌物、肾脏、肺脏等病毒靶组织),用PBS研磨成1:3悬液,在-20℃冻融1次,经12000 r/min离心3 min,上清液-20 ℃保存备用。
(2)取200uL上清液,移入1.5mL灭菌EP管中,加入200uLSR-I,漩涡振荡混合均匀,静置5min。
(3)加75uL TU-1,漩涡振荡混合均匀,12000r/min离心5 min。
(4)将上清转移到新的2 ml离心管(试剂盒内提供)中,加入300 uL SR-Ⅳ,上下倒置6-8次,混合均匀。
(5)将步骤4中的混合液移入制备管中(试剂盒内提供),并将制备管置于同一2 ml离心管,8000 r/min离心1min。
(6)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加500 uL SR-II,室温静置1min,12000 r/min离心1 min。
(7)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加700 uL SR-Ⅲ,12000 r/min离心1 min。
(8)将制备管置回到2 ml离心管中,12000 r/min离心2min。
(9) 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中(试剂盒内提供),在制备管膜中央加40 uL TU-2, 室温静置1 min。12000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板,即用或-20℃冻存备用。