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小鹅瘟病毒PCR检测试剂盒

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产品介绍

    【用途】 用于小鹅瘟病毒核酸的检测。

    试剂

    编号

    20T

    50T

    保存

    裂解液

    4mL

    10mL

    室温

    A

    无水乙醇

    4mL

    10mL

    室温

    去蛋白漂洗液

    12mL

    28mL

    室温

    洗涤液

    32mL

    77mL

    室温

    洗脱液

    2mL

    5mL

    室温

    蛋白酶K

    0.2mL

    0.5mL

    -20

    B

    PCR反应液

    200μL

    500μL

    -20

    引物

    40μL

    100μL

    -20

    阳性对照

    30μL

    30μL

    -20

    阴性对照

    300μL

    300μL

    -20

    DL2000 DNA Marker

    20μL

    50μL

    -20

    【操作步骤】

    1.样本前处理及核酸提取  

    样本前处理:

    取适量病料心、肝、肠等组织,于灭菌研钵充分研磨,用PBS按照13体积稀释成均匀乳剂,10 000rpm离心3 min

    核酸提取:

    (1)取200μL上述样本离心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL离心管,然后加入200μL裂解液,剧烈振荡。(蛋白酶K开盖使用后建议存于2-8)混匀5~10秒。

    (2)56℃温浴10分钟。

    (3)在上述离心管中加入200μL无水乙醇,充分振荡混匀5~10秒。

    (4)将步骤3中混匀的液体转移至一只套有收集管的纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,弃去套管内液体。

    (5)将500μL去蛋白漂洗液加入纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,并弃去套管内液体。

    (6)将700μL洗涤液加入纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,并弃去套管内液体。

    (7)可选:重复步骤(6)。

    (8)再将纯化柱放回接液管上,13 000rpm离心1分钟。

    (9)将纯化柱移到一只干净的1.5mL离心管中。

    (10)向离心柱内加50μL洗脱液,室温静置1分钟后12 000rpm离心1分钟,弃纯化柱,离心管内液体中含有基因组DNA。提纯的基因组DNA如果不立即使用,请保存于-20℃。

    2. PCR加样体系(总体系20 μL将下列试剂加入PCR反应管中。

【仅供科学研究使用】

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